Análisis del potencial epizoótico de cepas de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis aisladas de diversos hospedadores empleando modelos de infección in vitro

Abstract

Map es el agente causal de la paratuberculosis en una gran variedad de rumiantes domésticos y silvestres. Una vez que Map entra en el hospedador, generalmente a través de la vía fecal-oral, atraviesa el epitelio intestinal para ser posteriormente fagocitado por los macrófagos subepiteliales. Generalmente, los macrófagos responden frente al ataque de cualquier microorganismo induciendo una respuesta inmune dirigida a su eliminación. Sin embargo, las cepas virulentas de Map han desarrollado ciertas estrategias que les permiten evadir la respuesta inmune del hospedador y sobrevivir intracelularmente. La interacción Map-macrófagos del hospedador que se produce en los estadios iniciales de la infección es un indicador de la virulencia de Map y determina el riesgo de progresión de la enfermedad. El objetivo general de esta tesis doctoral es el de comparar la interacción de aislados de Map procedentes de rumiantes domésticos y silvestres y con distintos genotipos con macrófagos bovinos y ovinos, al ser éstas las dos especies animales en las que la paratuberculosis causa mayores pérdidas económicas. Este análisis permitirá determinar la virulencia, patogenicidad y adaptación a un determinado hospedador de distintos aislados de Map y sentará las bases para tratar de mejorar las estrategias de manejo y control de la paratuberculosis en granjas donde el ganado doméstico comparte pastos con animales silvestres potencialmente infectados con Map. Con objeto de determinar diferencias en la virulencia en los primeros estadios de la infección, se comparó la entrada, multiplicación y supervivencia de 11 aislados de Map de diversos genotipos (C, S y B) y procedentes de distintas localizaciones geográficas y hospedadores (bovino, ovino, caprino, jabalí, bisonte, ciervo y gamo) en modelos de infección in vitro bovinos y ovinos. Así mismo, se analizó la respuesta de los macrófagos a la infección con los aislados de Map seleccionados mediante el análisis de los perfiles de expresión de determinadas citoquinas y proteínas implicadas en apoptosis y destrucción tisular. Ambos parámetros, capacidad de supervivencia de los distintos aislados de Map y respuesta de los macrófagos a la infección, se correlacionaron con objeto de determinar la virulencia de cada aislado en los hospedadores bovino y ovino. Así mismo, y con el fin de comparar la virulencia de diversos aislados de Map en estadios más avanzados de la infección se determinó su capacidad para generar microgranulomas en condiciones in vitro. Por último y con objeto de adaptar los modelos de macrófagos desarrollos en este tesis a otros objetivos, como por ejemplo para su utilización en la evaluación de actividad fagocítica inducida por prototipos vacunales, se desarrolló un método inmunomagnético de enriquecimiento de monocitos CD14 + de bovino, ovino y caprino utilizando nanopartículas magnéticas funcionalizadas con un anticuerpo monoclonal anti-CD14 humano en combinación con la tecnología MACS.