Estudios moleculares e inmunologicos de la ferredoxina-nitrito reductasa del alga verde chlamydomonas reinhardtii

Laburpena

La nitrito reductasa cataliza la reduccion de nitrito a amonio en una reaccion que implica 6 electrones. Se ha purificado hasta homogeneidad electroforetica la enzima del alga verde chlamydomonas reinhardtii (estirpe mutante 104, que carece de actividad nadh-nitrato reductasa), usando como etapa basica la cromatografia hidrofobica en fenil-sefarosa. La proteina tiene un peso molecular de 86.000 y esta constituida por dos subunidades. Posee un radio de stokes de 3,56 nm, un coeficiente de sedimentacion de 6,0 s, presenta un espectro de absorcion con maximos a 280, 386 (banda soret), 574 (banda a) y 690 nm, y contiene como grupos prosteticos 1 sirohemo (e'o' ph 7,5 = - 160 mv) y 1 agrupacion sulfoferrica del tipo ]4fe-4s] por molecula. La composicion de aminoacidos muestra un contenido de 884 residuos, con elevada proporcion de aminoacidos apolares (42%) y predominio de aminoacidos acidos sobre basicos (pi = 6,2). A partir de esta composicion y de la titulacion con acido 5,5'-ditiobis-(2-nitrobenzoico), se ha observado que la enzima contiene 11 residuos de cisteina libres y 2 puentes disulfuro adicionales. La modificacion de los grupos tiolicos libres con reactivos especificos indican que como maximo 5 son esenciales para la actividad catalitica. La enzima nativa puede disociarse en sus subunidades, una de 63.000 daltons (enzima modificada) y otra de 25.000 daltons (proteina acoplante) que no posee actividad enzimatica y que parece contener el sitio de union de la ferredoxina. Se han obtenido anticuerpos policlonales frente a la ferredoxina-nitrito reductasa de c. Reinhardtii. Estos anticuerpos son capaces de inmunoprecipitar las actividades ferredoxina- y metil viologeno-nitrito reductasa. Esta proteina presenta reaccion antigenica cruzada con la ferredoxina-glutamato sintasa del mismo organismo, lo que parece indicar que ambas contienen determinantes antigenicos comunes localizados en los dominios enzimaticos implicados en la un