Sintesis enzimatica selectiva de 6¿galactosil lactosa

Resumen

En la presente tesis se ha llevado a cabo la síntesis selectiva de un trisacárido, 6¿galactosil lactosa, mediante una reacción de transglicosilación catalizada por un preparado enzimático comercial, utilizando como substrato de partida lactosa. En medio acuoso las condiciones óptimas para la síntesis corresponden a un pH de 6,5, temperatura entre 40-50º C y concentración de lactosa de 286 g/l disolvente. El rendimiento máximo obtenido en dichas condiciones fue de 18% p/p con una selectividad de 62%. Además se comprobó el efecto inhibitorio de los monosacáridos que se liberaban al medio como consecuencia de las reaccionies de transglicosilación e hidrólisis que ocurren simultaneamente en este proceso enzimático, por lo cual la retirada de los mismos conduciría hacia una mejora del rendimiento y la selectividad de la síntesis deseada. El empleo de sistemas bifásicos acuosos formados por polietilenglicol y sal, permitió la mejora en el rendimiento de trisacárido respecto a los obtenidos en sistemas acuosos tradicionales, debido principalmente a la retirada selectiva de los productos de reacción de la fase en la que se situa el biocatalizador. El sistema PEG 6000(9,9% p/p)/NaH2PO4 (6,6% p/p) proporcionó mejor rendimiento (24% p/p) y selectividad (70%) en trisacárido que los valores obtenidos en medio acuoso. El preparado enzimático empleado en esta tesis es capaz de proporcionar similares niveles de trisacárido que las enzimas de microorganismos mesófilos descritas anteriormente y resulta más selectivo para esta reacción que los preparados enzimáticos termófilos utilizados hasta la fecha descritos en la literatura.