Adaptation and development of culture-independent techniques for the indentification and enumeration of microorganisms in wine fermentations

Resumen

L'objectiu d'aquesta tesi va ser l'adaptació i validació de diferents tècniques independents de cultiu per a la detecció i quantificació de la microbiota present a la fermentació vínica. Es van assajar la QPCR (PCR quantitativa) per a la quantificació i seguiment d'espècies clau i la diversitat ecològica es va analitzar per DGGE (electroforesi en gel desnaturalitzant) i la clonació d'un fragment ribosomal.Tanmateix es va estudiar l'aplicació de la Hibridació in Situ (FISH) i la QPCR amb colorants específics per tal de diferenciar cèl·lules vives i mortes. Aquestes tècniques es varen aplicar a fermentacions industrials, essent notable la detecció de bacteris acètics i llevats No-Saccharomyces en concentracions superiors a les detectades com a poblacions cultivables. Es van estudiar interaccions entre llevats Saccharomyces i No-Saccharomyces al laboratori, observant-ne la supervivència d'aquestes en estats viables però no cultivables. Aquestes tècniques independents de cultiu indiquen una població i dinàmiques microbianes prèviament desapercebudes.