Marcadores de infección por Candida albicans y su utilidad en el diagnóstico y protección frente a la candidiasis invasora

Resumen

Las infecciones nosocomiales se han incrementado en las últimas décadas, y las levaduras del género Candida ocupan el cuarto lugar entre los agentes etiológicos identificados. Los pacientes con deficiencias inmunológicas tienen un alto riesgo de sufrir una candidiasis invasora (CI), aunque el uso profiláctico de fluconazol ha desviado la incidencia a pacientes con otras características: cirugía gastrointestinal, ingreso prolongado en UCI, antibioterapia de amplio espectro, catéter venoso central, diabetes y neonatos de bajo peso. El hemocultivo, método diagnóstico de CI de referencia, ofrece una baja sensibilidad (aprox. 50%) y puede tardar 24-48h en mostrar un resultado positivo. Un retraso de 12-24h en el tratamiento antifúngico puede doblar la mortalidad por candidemia, por lo que se requieren nuevos tests diagnósticos o identificar factores de riesgo que permitan adelantar el tratamiento antifúngico específico. Nuestro Grupo de Estudio de la Infección Fúngica Invasora (GEIFI) se centra en los métodos de diagnóstico y prevención de la CI, así como en la mejora de su tratamiento, y ha desarrollado una técnica de inmunofluorescencia indirecta para la detección de anticuerpos específicos (CAGTA) frente a antígenos de la pared celular de los tubos germinales de C. albicans asociados al proceso invasivo del hongo. Sehan identificado varios antígenos de C. albicans reconocidos por los CAGTA, entre los que podemos citar hyphal wall protein (Hwp1), agglutinin-like sequence 3 (Als3) o methionine synthase (Met6). Estos antígenos reconocidos por CAGTA podrían constituir la base para el desarrollo futuro de vacunas frente a esta infección, y algunos como la Als3 están en fase de ensayo clínico para la candidiasis vulvovaginal recurrente. Esta tesis pretende evaluar la utilidad diagnóstica de los antígenos Hwp1, Als3 y Met6, producidos de forma recombinante, para el diagnóstico de la CI mediante la detección de anticuerpos específicos. De forma paralela, se estudia el posible efecto protector de dichos antígenos como vacuna frente a la CI.Se ha determinado la presencia de anticuerpos frente a los antígenos Hwp1, Als3 y Met6, mediante ensayos ELISA, así como niveles de CAGTA y la concentración de beta-glucano (BDG) en sueros de 297 pacientes diagnosticados de infección fúngica invasora y controles, todos ellos con factores de riesgo para sufrir una CI. Se determinó la utilidad diagnóstica de las distintas pruebas por separado y en combinación. La detección de CAGTA presentó valores de sensibilidad moderados, sin embargo, destaca por su alta especificidad >90%, y mejoraba su rendimiento global rebajando el punto de corte de 1/160 a 1/80, tanto en pacientes inmunocompetentes como en inmunodeprimidos. El ensayo ELISA anti-Als3 presentó mejores resultados diagnósticos en pacientes inmunocompetentes en comparación con los ELISA anti-Hwp1 y anti-Met6. Por el contrario, en pacientes inmunodeprimidos la detección de anticuerpos anti-Met6 mostró los mejores índices de utilidad diagnóstica. La combinación de resultados de BDG y CAGTA (1/80) alcanzó el mejor rendimiento para el diagnóstico de CI en pacientes inmunocompetentes. En cambio, para pacientes inmunodeprimidos, la mejor combinación fue la de la prueba ELISA anti-Met6 con la detección de CAGTA.Dado que los pacientes con CI desarrollaban anticuerpos frente a los antígenos Hwp1, Als3 y Met6, se diseñó un experimento de inmunización frente a la CI en modelo murino, basado en estas proteínas. Se seleccionó, para cada uno de ellos, una secuencia de 15-18 aminoácidos contenida en epítopos de modelos teóricos, y se construyó un péptido complejo (3P-KLH) con espaciadores glicina-prolina (GPGPG) y secuencias key li (LRMKLPKS) para mejorar la presentación de los epítopos, y conjugado a KLH como proteína transportadora. Los ratones fueron inmunizados con dos dosis de 3P-KLH, separadas 21 días, y el grupo control solo recibió KLH. Veintiún días después de la segunda inmunización se procedió a la inoculación intravenosa de los ratones con levaduras de C. albicans. En comparación con el grupo control, cuya media de supervivencia fue 6 días, en los ratones inmunizados con 3P-KLH la carga fúngica en riñones fue 30 veces inferior y a los 21 días de seguimiento se registró una supervivencia del 37,5%.