Estudio comparativo de las acetiltransferasas aac(3) subclases ii y v

Abstract

LOS ESTUDIOS REALIZADOS EN EL HOSPITAL CLINICO UNIVERSITARIO DE ZARAGOZA SOBRE LOS PLASMIDOS QUE DETERMINAN RESISTENCIA A AMINOGLICOSIDOS MOSTRARON LA PRESENCIA DE UN PLASMIDO R EPIDEMICO DEL GRUPO INC M DE 78 KB. ESTE PLASMIDO CONFIERE RESISTENCIA A GENTAMICINA POR LA PRODUCCION DE UNA AAC(3) SUBCLASE V. ESTA ENZIMA SE HA COMPARADO CON OTRA DEL MISMO TIPO PERO DE DISTINTA SUBCLASE: LA AAC(3)-II. AMBAS ENZIMAS PRESENTAN UN PERFIL DE SUSTRATO SIMILAR DIFERENCIANDOSE EN QUE ESTA ULTIMA MODIFICA E INACTIVA AL ANTIBIOTICO KANAMICINA A, MIENTRAS QUE LA AAC(3)-V MODIFICA MUY LEVEMENTE ESTE ANTIBIOTICO SIN PROVOCAR INACTIVACION. AMBAS ENZIMAS SE HAN ESTUDIADO SIMULTANEAMENTE MEDIANTE DIVERSAS TECNICAS. DESDE EL PUNTO DE VISTA MICROBIOLOGICO SE HA ESTUDIADO EL PATRON DE RESISTENCIA QUE DETERMINAN CAPAS PORTADORAS DE LOS PLASMIDOS QUE LAS CODIFICAN (PUZ1004 Y PIP 176) MEDIANTE LA TECNICA DISCOPLACA Y LA DETERMINACION DE SU CONCENTRACION INHIBITORIA MINIMA FRENTE A VARIOS ANTIBIOTICOS AMINOGLICOSIDOS. DESDE EL PUNTO DE VISTA BIOQUIMICO SE HAN ESTUDIADO LOS PERFILES DE SUSTRATO QUE CONFIEREN, ASI COMO LOS FACTORES QUE INFLUYEN SOBRE SU ACTIVIDAD CATALITICA (PH, FUERZA IONICA Y TEMPERATURA) MEDIANTE EL ENSAYO RADIOENZIMATICO. ESTAS ENZIMAS SE HAN PURIFICADO A HOMOGENEIDAD MEDIANTE TECNICAS DE CROMATOGRAFIA EN COLUMNA (INTERCAMBIO IONICO Y AFINIDAD). A PARTIR DE LAS ENZIMAS PURIFICADAS SE DETERMINO SU PESO MOLECULAR Y SU PUNTO ISOELECTRICO, ASI COMO SU COMPORTAMIENTO CINETICO (KM Y V MAX) FRENTE AL ANTIBIOTICO SUSTRATO GENTAMICINA CLA. EL ESTUDIO SE COMPLETO CON LA HIBRIDACION EN COLONIA MEDIANTE SONDAS ADN DE LA AAC(3)-V.