Posibilidades analíticas de la fluorescencia molecular intrínseca y extrínseca de las enzimas para la determinación de alcoholes, glucosa y colesterol. Desarrollo de biosensores ópticos

Resumen

Se han estudiado nuevas posibilidades de la fluorescencia molecular en relación con la determinación de sustratos a través de reacciones enzimáticas en distintas direcciones: 1) Se han llevado acabo determinaciones simultaneas de dos alcoholes (propanol y butanol) siguiendo la fluorescencia intrinseca de la alcohol deshidrogenasa. Comparando dos métodos distintos, por un lado un estudio de la cinética del proceso enzimático y por un procedimiento de calibración multivariable. 2) Encontramos un nuevo mecanismo de cambio en la intensidad de fluorescencia para enzimas oxidasas, el cual parece estar basado en proceso de transferencia de energia entre los aminoácidos y el FAD. Este método nos permitió llevar a cabo la determinación de glucosa en suero sanguineo. 3) Se logró desplazar la zona espectral de trabajo hacia mayores longitudes de onda a través de un procedimiento de derivatización de enzimas con reactivos fluorescentes, encontrando que es un procedimiento adecuado para enzimas oxidasas. Este procedimiento nos permitió llevar a cabo la determinación de glucosa y colesterol en muestras de suero sanguineo sin someterlo a ningún tipo de pretratamiento. 4) Finalmente se encontró la idoneidad de la inmovilización de las enzimas derivatizadas en soportes de sol-gel para la determinación de analitos, mostrando que éste es un soporte adecuado para la obtención de futuros sensores ópticos.