Evaluación del efecto de bevacizumab, ranibizumab y aflibercept sobre células del epitelio pigmentado de la retina, en condiciones normales y de estrés oxidativo

Resumen

En la actualidad se desconoce si el desarrollo de atrofia geográfica (AG) observado en pacientes con degeneración macular asociada a la edad (DMAE) exudativa tratados mediante inyecciones intravitreas de fármacos antiangiogénicos es un efecto toxico de los medicamentos, o por el contrario responde a la evolución natural de la enfermedad. El objetivo del este trabajo fue evaluar si la inhibición farmacológica del factor de crecimiento vascular endotelial (VEGF) mediante Bevacizumab, Ranibizumab y Aflibercept afecta la supervivencia y en las funciones de barrera y fagocitosis de las células del epitelio pigmentario de la retina (EPR). Los ensayos se realizaron in vitro utilizando la línea celular ARPE-19. Con la finalidad de reproducir las condiciones de la práctica clínica se utilizaron concentraciones equivalentes a la dosis habitual de los fármacos y se evaluó el efecto de dosis únicas y repetidas de los antiangiogenicos, en condiciones normales y de estrés oxidativo. Se analizó también la acumulación intracelular de los 3 medicamentos y su efecto en la expresión y actividad de los principales reguladores de la fagocitosis Mer-TK, la 5v integrina y las fibras de actina del citoesqueleto. Mediante citometría de flujo se detectó que los 3 fármacos se acumulan de forma significativa en el interior de las células, sin embargo la viabilidad, proliferación y migración celular, evaluadas mediante ensayos de MTT, BrdU y wound healing, no se vieron afectadas por los tratamientos. Solo se observó un leve pero no significativo aumento en la actividad de la caspasa 3 en las células tratadas, detectado mediante inmunofluorescencia. En cuanto a los ensayos de funcionalidad, los antiangiogenicos no modificaron la importante función de barrera (evaluada mediante mediciones de resistencia transepitelial), pero al combinar los tratamientos con H2O2, los 3 fármacos fueron capaces de reducir de forma significativa el efecto nocivo del daño oxidativo. Por otra parte y contrario a lo observado en células expuestas a VEGF, los 3 medicamentos indujeron un aumento en la fagocitosis de microesferas fluorescentes, un efecto que fue significativo en el caso de Bevacizumab y Aflibercept. Estos resultados no parecen estar relacionados por diferencias en la expresión de los principales reguladores de la fagocitosis analizados en este estudio y por el contrario, los resultados observados sugieren que podrían responder modificaciones en la arquitectura normal del citoesqueleto, alterada por la exposición a VEGF. Nuestro estudio aporta datos importantes acerca del efecto de los antiangiogénicos en la viabilidad y funcionalidad del EPR, pues por primera vez, evalúa el efecto acumulativo de dosis repetidas de los fármacos, algo necesario en el tratamiento de las enfermedades vasculares de la retina, así como su efecto en condiciones de estrés oxidativo, un elemento importante en la compleja fisiopatología de enfermedades como la DMAE. Por otro lado, este es el primer trabajo que utiliza células polarizadas para analizar la funcionalidad de las células expuestas a los fármacos. Aunque el tiempo de seguimiento es corto y el número de dosis repetidas utilizadas es limitado, nuestros resultados se suman a la evidencia clínica reciente que sugiere que la AG observada en los pacientes con DMAE húmeda tratados con antiangiogénicos, puede estar relacionada más con la evolución natural de la enfermedad que con un efecto tóxico de estos medicamentos.