Clonación, secuenciación y caracterización de los genes que codifican el sistema asimilador de reducción del nitrato en rhodobacter capsula e1f1

Resumen

La bacteria fototrófia Rhodobacter capsulatus E1F1 posee un sistema de reducción del nitrato de tipo asimilador, que se induce en presencia de nitrato/nitrico y se regula negativamente por amonio.Mediante la utilización de tipo asimilador, que se induce en presencia de nitrato/nitrito y se regula negativamente por amonio. Mediante la utilización de oligonucleótidos degenerados se ha amplificado por PCR un fragmento de 0,4 Kb del gen nasA de R. Capsulatus, que ha sido utilizado como sonda para escrutinio de una librería genómica, lo que ha permitido la identificación de dos cósmidos que contienen la región nas. Las secuenciación y el análisis de aproximadamente 17kb correspondientes al DNA exógeno de uno de estos cósmicos ha revelado la presencia de 14 genes , la mayoría relacionados con la asimilación del nitrato y nitrito. La región nas secuenciada comprende los genes reguladores nasT , nasS y nsrR. Tres genes estarían implicados en el transporte de nitrato/nitrito: nasF codificaría el componenete los genes periplásmico, nasE el componente integral de membrana y nasD la subunidad citoplásmatica con actividad ATPasa. Tras estos genes se localizan los genes estructurales nasA, nasB y nirD que codifican las enzimas nitrato y nitrito. El gen cysG implicado en la síntesis de sirohemo y el gen moaD que participa en la síntesis del cofactor de molibdopterina y guanina también se localizan en esta regién. El gen chrA codificaría una proteína homóloga a un transportador de cromato y el gen nnrS una proteína de menbrana que problamemente participa en la taxis hacia el nitrato. Por último , en esta región también se localiza el gen hcp que codifica una posible proteína de centro híbrido .La función fisiológica de esta proteína ha sido un enigma hasta que recientemente se ha demostrado que la proteína HCP de E.coli posee actividad hidroxilamina reductasa. Mediante RT-PCR e hibridación Northerm se ha demostrado que