Biología molecular aplicada al estudio genético de la resistencia a ampicilina en cepas de salmonella spp

Resumen

PARA ESTUDIAR EL MECANISMO DE RESISTENCIA A AMPICILINA EN SALMONELLA SPP., MARCADOR QUE MAS HA AUMENTADO EN ESTOS ULTIMOS AÑOS, SE SELECCIONARON 33 CEPAS QUE FUERON SOMETIDAS A ANALISIS PLASMIDICO, CONJUGACION Y A LA TECNICA DE ISOELECTROENFOQUE ANALITICO. SE COMPROBO QUE LA MAYORIA DE CEPAS PORTABAN PLASMIDOS CONJUGATIVOS DE UN TAMAÑO DE 125, 8, 5.8, 2.4 Y 1.1 MDAL. POR ISOELECTROENFOQUE SE DEMOSTRO QUE EL 9.6% DE LA RESISTENCIA A AMPICILINA SE DEBIA A LA PRESENCIA DE BETALACTAMASAS TIPO TEM (TEM-1 Y TEM-2). PARA PROFUNDIZAR EN LAS BASES GENETICAS DE ESTA RESISTENCIA SE DESARROLLARON TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR QUE PERMITEN UNA DETECCION MAS RAPIDA Y ESPECIFICA DEL GEN CODIFICANTE DE LA RESISTENCIA. PARA ELLO, SE OBTUVO UNA SONDA DE 420 BP. MARCADA CON DIGOXIGENINA DEL PLASMIDO PBR322. ESTA SONDA FUE UTILIZADA EN EXPERIMENTOS DE HIBRIDACION EN COLONIAS Y DE SOUTHERN TRANSFER. EL GEN BLA-TEM SE LOCALIZO PRINCIPALMENTE EN LOS PLASMIDOS DE 125, 8, Y 5.8 MDAL. EN S. TYPHIMURIUM APARECIO UN ENZIMA QUE A PESAR DE TENER UN PI COMPATIBLE CON TEM NO HIBRIDO CON LA SONDA. LA OBTENCION DE SONDA TEM MEDIANTE LA TECNICA DE LA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) DIO UNOS RESULTADOS EXCELENTES. LA SONDA TEM INTRAGENICA NO PERMITE DISCRIMINAR LAS MUTACIONES PUNTUALES QUE DIFERENCIAN LOS ENZIMAS TEM-1 Y TEM-2. PARA LOGRAR UNA CARACTERIZACION ESPECIFICA SE UTILIZARON SONDAS DE OLIGONUCLEOTIDOS PORTADORAS DE LA MUTACION PUNTUAL EN LA POSICION CENTRAL DE LA SECUENCIA. LA TECNICA DE SOUTHERN TRANSFER COMBINADA CON LA AMPLIFICACION DEL DNA DE LAS CEPAS DE SALMONELLA RESULTO SER UN METODO RAPIDO Y MUY EFICAZ.