Caracterización y purificación de una proteína específica que une esteroides en la membrana plasmática

Resumen

LOS ESTEROIDES Y LAS HORMONAS TIROEDEAS, POR SUS CARACTERISTICAS, PUEDEN PENETRAR EN LA CELULA POR DIFUSION PASIVA E INTERACCIONAR CON RECEPTORES CITOSOLICOS. POR OTRO LADO, EXISTE CADA VEZ MAS EVIDENCIAS DE UNA TOMA DE ESTEROIDES MEDIADA POR MEMBRANA, HABIENDO UNA GRAN CONTROVERSIA CON LOS DEFENSORES DE LA TOMA PASIVA. OTROS ARTICULOS CIENTIFICOS PARECEN INDICAR QUE REALMENTE EXISTE ALGUN TIPO DE RECEPTOR, EXCLUSIVO O NO PARA ESTEROIDES, CUYAS RESPUESTAS FISIOLOGICAS NO SON MEDIDAS POR LA SINTESIS DE PROTEINAS. NUESTROS RESULTADOS DEMUESTRAN LA PRESENCIA DE CENTROS ESPECIFICOS DE UNION PARA ESTEROIDES EN HEPATOCITOS DE RATA Y MEMBRANA PLASMATICA DE HIGADO. LA UNION ES SATURABLE, CON EL TIEMPO Y LA CONCENTRACION DE SUSTRATO Y REVERSIBLE. OTROS ESTUDIOS NOS PERMITEN AFIRMAR LA EXISTENCIA DE GRUPOS SULFIDRILO EN EL CENTRO DE UNION QUE SE CONFIRMA COMO UNA PROTEINA DE MR APARENTE 120000 EN TAMIZADO MOLECULAR Y CON COEFICIENTE DE SEDIMENTACION DE 4.8S. LA TECNICA DE MARCAJE POR FOTOAFINIDAD CON R5020 NOS HA PERMITIDO ESTUDIAR MAS DETALLADAMENTE ESTE CENTRO DE UNION, AL QUE SE UNE ESTE ESTEROIDE DE UNA MANERA SATURABLE Y REVERSIBLE, PERMITENDONOS AFIRMAR QUE LA UNION COVALENTE SE ESTA LLEVANDO A CABO EN EL. POR ESTE METODO SE HA IDENTIFICADO UNA PROTEINA DE 53 KDA DE PESO MOLECULAR Y COEFICIENTE DE SEDIMENTACION 3.6S. EL ESTUDIO CON ANTICUERPOS ANTI-CBG, ASI COMO CIERTAS DIFERENCIAS EN AFINIDAD POR ESTEROIDES SINTETICOS, INDICAN QUE SE TRATA DE PROTEINAS DIFERENTES. LA PROTEINA ESPECIFICA MENCIONADA HA SIDO PURIFICADA 12500 VECES. ES UNA GLICOPROTEINA QUE PRESENTA, EN ELECTROFORESIS EN SDS, DOS BANDAS DE 59 Y 65 KDA. ESTA PROTEINA DE MEMBRANA, CON CAPACIDAD PARA UNIR ESTEROIDES, PUDIERA SER, UN CARRIER PARA LA INTRODUCCION DEL ESTEROIDE EN LAS CELULAS DIANA, PERO PUDIERA TENER TAMBIEN, DE ACUERDO CON LOS DATOS DE EFECTOS RAPIDOS DE LOS ESTEROIDES, UN PAPEL COMO PRIMER RECEPTOR CELULAR PARA LOS ESTEROIDES.