Conformational transitions modulate glycosyl transferase function at the membrane surface

Resumen

PimA es una enzima clave para la biosíntesis de PIMs, LM y LAM, factores de virulencia de M.tuberculosis, yademás es el paradigma de la superfamilia de glicosiltransferasas B. Su mecanismo molecular dereconocimiento de sustratos/membrana es poco conocido. Para avanzar en el entendimiento de las basesmoleculares que gobiernan su actividad, se resolvió su estructura cristalina en ausencia de ligandos a 3,1 Å deresolución. La característica mas sobresaliente de esta forma cristalina es que la proteína no exhibe la topologíaclásica de un ¿Rossmann-fold . La comparación detallada de las formas APO y en complejo con GDP-Man,resuleto previamente, reveló el intercambio de elementos de estructura secundaria los residuos 118 a 163,fenómeno denominado ¿reshuffling¿. Se observaron transiciones de tipo `ß- strand-to-¿-helix¿ y `¿-helix-to-ß-strand¿. Para investigar el efecto del sustrato aceptor (PI) y/o la bicapa de fosfolípidos en esta transición,realizamos estudios de espectroscopia de fluorescencia y dicroismo circular. En este trabajo proponemos unmodelo por el cual, PimA se asocia a la membrana, guiada por interacciónes electrostáticas, debido a suanfipaticidad y afinidad por SUVs cargados negativamente. Este interacción conllevaría un reordenamiento dezonas localizadas en el dominio N-terminal para producirse un reconocimiento y posterior estabilización conPI.