Polyplexes based on ultrapure oligochitosansdesign, characterization and applications for gene therapy.

Abstract

Esta tesis doctoral se basa en el uso de oligoquitosanos ultrapuros (UOC) como vectores no-virales para el transporte de genes. El quitosano (Ch) es un polímero natural compuesto de cadenas ß-(1-4) D-glucosamina y N-acetil-D-glucosamina unidas por enlaces (1-4) glucosídicos. Gracias a los grupos amino del quitosano cargados positivamente es posible la unión electrostática con moléculas de carga negativa, como el ADN, dando lugar a lo que llamamos poliplexos (poliplexos Ch/ADN). En esta tesis hemos trabajado con quitosanos de bajo peso molecular y alto grado de deacetilación, Novafect O15 y O25 concretamente, ya que presentan unas características adecuadas para el transporte de genes. A pesar de que numerosos trabajos describen las prometedoras características de este polímero para su uso en terapia génica, el problema relacionado con su baja eficiencia de transfección aún persiste. Por ello, en este trabajo hemos evaluado in vitro la influencia de factores fisicoquímicos, especialmente el pH, en el proceso de transfección de poliplexos basados en quitosanos de bajo peso molecular. También hemos analizado la capacidad de estos poliplexos para transportar un plásmido de gran tamaño y transfectar células pulmonares. Y por último, hemos tratado de conocer el propio proceso de transfección de lo poliplexos en células precursoras neuronales, mediante su comparación con otros dos tipos de vectores no-virales.