Estudio estructural de los polisacáridos capsulares de Sinorhizobium Fredii

Résumé

La estructura del polisacárido capsular S. Fredii HH103 se ha determiando mediante la utilización de las técnicas avanzadas de determinación estructural; electroforesis en geles de poliacrilamida, cromatografía de gases/espectrometría de masas, análisis por metilación, MALDITOF, FAB-EM, IE-EM, de alta resolución y resonancia magnética nuclear. La estructura propuesta es la de un homopolímero del ácido 5-acetamido-3,5,7, 9-tetradesoci-7-(3-hidroxibutanamido)-l-glicero-L-mano-non-2-ulosónico, en el que el enlace entre las distintas unidades se lleva a cabo a través del hidroxilo de la cadena lateral de 3-hidroxibutanamido. Posteriormente se ha realizado el estudio de modelización molecular en disolución del monosacárido de repetición y del polisacárido capsular de S. Freddi HH103. La estructura del polisacárido capsular de S. Fredii SVQ293 se ha determiando mediante el uso de las siguientes técnicas:cromatografía gas-líquido/espectrometría de masas, análisis por metilación, FAB y resonancia magnética nuclear. La estructura propuesta para el polisacárido capsular es la de un polisacárido lineal fomrado por el siguiente trisacárido de repetición: Como en el caso del polisacárido capsular de la estirpe nativa, se ha llevado a cabo el estudio de modelización molecular en disolución del trisacárido de repetición anterior. La estirpe HH103, junto con la estirpe HH303, son las únicas estirpes descritas hasta ahora que no producen un polisacárido capsular con la unidad estructural general que se ha propuesto para los polisacáridos capsulares de S.fredii y S,. Meliloti. Este hecho parece estar relacionado con la capacidad de nodualción de estas estirpes con las variedades americanas de soja, e indica que los polisacáridos capsulares jeugan un papel importante en la especificidad bacteria-huésped. El estudio de la simbiosis entre las bacterias fijadoras de nitrógeno y las plantas leguminosas es un tema de enorme interés: por un lado, se intenta reducir el uso de fertilizantes nitrogenados, que plantean una seria de problemas como son su elevado coste de producción y la contaminación debida a su uso indiscriminado; por otro lado, la simbiosis Rhizobiaceae-leguminosa permite el estudio de los procesos de reconocimiento celular entre la bacterias y la planta hospedadora y. por tanto, proporciona un sistema atractivo para elucidar las bases moleculares de las interacciones que los microorganismos (patógenos y simbióticos) establecen como las plantas. En esta Tesis se ha investigado la estructura de los polisacáridos capsulares aislados de la cepa HH103 de Sinorhizobium fredii y de un mutante (SVQ293) derivado de ésta, y se ha procedido a su estudio conformacional. Este trabajo se incluye dentro de un proyecto de investigación dedicado al estudio de los diversos carbohidratos producidos por estas cepas. Anteriormente han sido estudiados los factores de nodulación de HH103. La presente Tesis está divida en cuatro capítulos. En el primero se presenta la introducción. El segundo corresponde a los métodos generales utilizados. En el tercero se describe la determinación estructural del CPS aislado de S. fredii HH103 y su estudio conformacional. El cuarto describe también la determinación y el estudio conformacional del CPS aislado del mutante SVQ293. Finalmente, se recogen las conclusiones y la bibliografía.