Efecto de los materiales de recubrimiento pulpar directo sobre células de la pulpa dental humana mantenidas in vitro. Propuesta de un modelo experimental para el estudio de la dentinogénesis reparativa

Résumé

EL PRESENTE TRABAJO PRETENDIO PROFUNDIZAR EN EL ESTUDIO DE LA RESPUESTA FUNCIONAL DE LAS CELULAS PULPARES HUMANAS, TRAS SU EXPOSICION AL HIDROXIDO DE CALCIO. SE OBTUVO EN CONDICIONES ESTERILES TEJIDO PULPAR DE TERCEROS MOLARES INCLUIDOS SANOS DE SUJETOS ADOLESCENTES. LA SEPARACION DE LAS CELULAS PULPARES SE LLEVO A CABO MEDIANTE UN GRADIENTE ISOPICNICO DE METRIZAMIDA DE LA SUSPENSION CELULAR, PROCEDENTE DEL DISGREGADO DE TEJIDO PULPAR, OBTENIDO TRAS SU DIGESTION CON COLAGENASA TIPO 1 AL 0.05%. LA IDENTIFICACION DE LAS CELULAS PULPARES VIABLES SE EFECTUO MEDIANTE DETERMINACION DE PARAMETROS FISICO POR CITOMETRIA DE FLUJO, EXPRESION DE VIMENTINA, ASI COMO DE SUS MARCADORES FUNCIONALES (SECRECION DE COLAGENO I, TGF-BETA, Y ACTIVIDAD FOSFATASA ALCALINA). EL CULTIVO DE LAS CELULAS PULPARES SE REALIZO SOBRE SUBSTRATOS DE BIOMATRIZ ARTIFICIAL, EN MEDIOS ENRIQUECIDOS PARA CELULAS DIPLOIDES, SUPLEMENTADOS CON SUERO Y FACTORES DE CRECIMIENTO. LA APLICACION DE SONDAS FLUORESCENTES ESPECIFICAS, EN COMBINACION CON LA MICROFUORIMETRIA DE BARRIDO PARA PLACAS, PERMITIO EL SEGUIMIENTO DE PARAMETROS FUNCIONALES DE DIFERENCIACION, PROLIFERACION Y DE PRODUCCION DE MOLECULAS DE LA MATRIZ EXTRACELULAR. LA SECRECION DE CITOCINAS PLEIOTROPICAS (IL-1BETA, IL-6 Y TGF-BETA) SE EFECTUO MEDIANTE ELISA. SOBRE ESTA BASE SE ESTUDIO CAMBIOS FUNCIONALES EN LAS CELULAS PULPARES TRAS SU EXPOSICION A LIPOPOLISACARIDOS (LPS), Y SU TRATAMIENTO CON HIDROXIDO DE CALCIO EN ESTADO DE ACTIVACION PREVIA O NO POR LA INTERLEUCINA-1BETA. SE DEMOSTRO UNA ACTIVACION FUNCIONAL MUY SIGNIFICATIVA DE LAS CELULAS PULPARES TRAS SU EXPOSICION AL HIDROXIDO DE CALCIO. SIN EMBARGO, EL COMPORTAMIENTO CELULAR OBSERVADO FUE DISTINTO, DEPENDIENDO DE LA EXISTENCIA O NO, DE UN EFECTO PREVIO DE LA IL-1 SOBRE LAS CELULAS PULPARES: A) EN AUSENCIA DE IL-1, LAS CELULAS PULPARES INCREMENTARON SIGNIFICATIVAMENTE SU PROLIFERACION, CON UN PATRON DE RESPUESTA DOSIS-DEPENDIENTE; EN ESTAS CONDICIONES, EL