Estudio de la bioactividad de los péptidos de origen lácteo

Zusammenfassung

Se investigaron nuevos péptidos con actividad inhibidora de la enzima convertidora de la angiotensina-I(ECA) en quesos tradicionales, y se estudió su efecto osteogénico utilizando un modelo in vivo dedesarrollo esqueletal de pez cebra.En primer lugar se desarrolló un nuevo modelo de relación cuantitativa estructura-actividad paraoligopéptidos inhibidores de la ECA. Para describir la estructura del péptido en el modelo, se consideró lainformación relativa al pentapéptido C-terminal. Se construyó una base de datos con 263 péptidosinhibidores de la ECA y 38 descriptores fisicoquímicos de aminoácidos. El modelo se generó a través deun modelo lineal generalizado, con una distribución gamma, obteniéndose un coeficiente dedeterminación de 94,4%. Toda la información del pentapéptido C-terminal del oligopéptido fuedeterminante para el modelado de la actividad de inhibición de la ECA. La posición C-1, a partir del C-terminalfue la posición más relevante en el modelo, seguida por la posición C-4.Posteriormente se analizó el perfil peptídico de un queso maduro (D.O. Idiazabal) usando una separaciónHPLC ortogonal: cromatografía de intercambio catiónico fuerte seguida de una cromatografía líquida defase inversa, en combinación con espectrometría de masas MALDI-TOF-TOF. Con los espectrosobtenidos se realizaron búsquedas en bases de datos propias, y se identificaron 231 péptidos derivadosde proteínas de lácteas y de fragmentos de enzimas microbianos. La actividad potencial inhibidora de laECA de los péptidos identificados en el queso, se predijo con el modelo de relación cuantitativaestructura-actividad. Se sintetizaron diez péptidos y se determinó su actividad inhibidora de la ECA invitro, entre ellos seis nuevos péptidos presentaron una alta actividad in vitro con valores IC50 de entre 4 y32µM.A partir de la actividad inhibidora de la ECA predicha por el modelo, se seleccionaron y sintetizaron cinconuevos péptidos potencialmente inhibidores. Se realizó un ensayo con células osteoblásticas enproliferación, y de entre los cinco péptidos se seleccionó el péptido con código CT7 como candidato paraanalizar su potencial efecto osteogénico en el modelo in vivo de desarrollo esqueletal de pez cebra. Comopéptido control se seleccionó el tripéptido antihipertensivo IPP. En el ensayo de desarrollo esqueletal seobservó que el tratamiento con el glucocorticoide prednisolona provocó una reducción significativa (p <0.05) en el área y en la densidad óptica de los huesos mineralizados con respecto al grupo sintratamiento, mientras que las larvas tratadas con prednisolona y el péptido CT7 ó IPP, revertieron lapérdida ósea provocada por el qlucocorticoide.