Caracterización del plásmido pab-40 y otros marcadores genéticos de virulencia en clones multirresistentes de acinetobacter baumanni

Résumé

Acinetobacter baumannii es un patógeno oportunista causante de infecciones nosocomiales graves; los carbapenems están considerados como la última alternativa terapéutica en dichas infecciones, sin embargo en los últimos años se ha incrementado de forma importante y preocupante el aislamiento de cepas multirresistentes especialmente a los carbapenems. Uno de los mecanismos de resistencia que está aumentando su importancia es la presencia de carbapenemasas, como por ejemplo de tipo OXA (siendo OXA-40 endémica en nuestro medio). A pesar de que este microorganismo es señalado como posible fuente de acumulación y transmisión de genes de resistencia, muy poco se conoce sobre la presencia de estructuras móviles como plásmidos y su relación con la resistencia y, menos aún, de su relación con la diseminación de la carbapenemasa OXA-40. Los objetivos del proyecto son: - Caracterizar la evolución a lo largo del tiempo (desde el año 1999 hasta 2008) de dos clones multirresistentes y portadores de la carbapenemasa OXA-40. Comparación con otros clones multirresistentes detectados en el mundo. - Identificar y caracterizar plásmidos presentes en Acinetobacter baumannii y determinar su interés epidemiológico. Caracterizar plásmidos asociados a la resistencia a carbapenems y, determinar la relación existente entre la carbapenemasa OXA-40 y plásmidos como posible mecanismo de diseminación. Para lograr los objetivos propuestos se plantea el siguiente plan de trabajo: - Análisis de la resistencia global de un grupo seleccionados de aislamientos frente a los antibióticos más utilizados en el tratamiento de infecciones causadas por este microorganismo, como betalactámicos, aminoglucósidos y quinolonas. - Determinación de la estructura clonal de los aislamientos resistentes a imipenem mediante técnicas de caracterización genética (PCR y PFGE con ApaI). - Caracterización genética de los aislamientos: detección de genes implicados en la resistencia (carbapenemasas) y virulencia (genes ompA y csuE) mediante técnicas de PCR-multiplex. - Análisis de la presencia de estructuras genéticas móviles relacionadas con resistencia: detección de integrasa de clase 1, detección de secuencias de inserción y secuencias repAci1, y detección de plásmidos.