Implicación de Anexina A5 en la progresión maligna del melanoma humano. Valor pronóstico

Résumé

El melanoma cut¿neo es un tumor maligno que se origina a partir de la transformaci¿n maligna de los melanocitos de la epidermis. El inter¿s por este tumor es cada vez mayor, ya que la incidencia de esta neoplasia crece de modo constante y alarmante en la poblaci¿n general, pero principalmente en los pa¿ses desarrollados desde los a¿os 50. Entre las caracter¿sticas del melanoma es bien conocido su potencial maligno, es decir, su elevada capacidad de diseminaci¿n y de met¿stasis. Esto, junto con el hecho de que no existe un tratamiento efectivo para el melanoma metast¿tico, lo convierte en un tumor potencialmente letal.En la actualidad, la mejora del tratamiento del melanoma requiere establecer nuevos abordajes terap¿uticos y factores pron¿sticos m¿s eficientes, y para ello es necesaria una comprensi¿n m¿s detallada de las bases moleculares de esta patolog¿a. Recientes estudios han implicado a una familia de prote¿nas, las anexinas, con el desarrollo y la progresi¿n de distintos tumores. Las caracter¿sticas biol¿gicas generales de las anexinas incluyen muchas acciones que son directa o indirectamente relevantes en determinados procesos tumorales; destacan su papel en la adhesi¿n celular, la participaci¿n en la transducci¿n de se¿ales celulares, la inmunosupresi¿n, la apoptosis, el mantenimiento de la integridad del citoesqueleto y la matriz extracelular y la respuestas frente a est¿mulos de proliferaci¿n y diferenciaci¿n celular.El objetivo principal de esta tesis ha sido establecer una relaci¿n entre la prote¿na Anexina A5 (ANXA5) y las propiedades invasivas de las c¿lulas de melanoma, adem¿s de evaluar el posible valor pron¿stico de esta prote¿na ANXA5 en el desarrollo de la enfermedad.Los resultados obtenidos confirman una expresi¿n diferencial de la prote¿na ANXA5 entre las l¿neas celulares de melanoma analizadas. Se ha encontrado una correlaci¿n significativa entre la expresi¿n de ANXA5 y la capacidad migratoria e invasiva de las l¿neas celulares de melanoma, lo que sugiere una implicaci¿n de dicha prote¿na en los mecanismos moleculares implicados en la migraci¿n y la invasi¿n celular.Tras el silenciamiento del gel ANXA5 se llevaron a cabo estudios de expresi¿n g¿nica utilizando arrays espec¿ficos donde se detectaron cambios de expresi¿n de genes relacionados con la capacidad migratoria e invasiva de las c¿lulas. Concretamente, en las c¿lulas silenciadas destacan los genes sobreexpresados ARHGEF7, DPP4, PAK1, PAK4, y SRC, y genes cuya expresi¿n se ve reducida: ACTN3, EGFR, FAP, LIMK1, MYL9, PFN1, PTK2, PTK2¿, RAC1, RHO, TGF¿1, VEGFA y WASL. Tras seleccionar aquellos genes cuyo cambio de expresi¿n se consider¿ m¿s significativo, se analiz¿ la variaci¿n en la cantidad de las prote¿nas ARHGEF7, FAP, PTK2¿, RAC1, VEGFA y WASL mediante western blot. A trav¿s de los resultados obtenidos se evidencia que ANXA5 posee un efecto sobre las prote¿nas analizadas que, de modo directo o indirecto, est¿n relacionadas principalmente con la regulaci¿n del citoesqueleto de actina.Por otro lado, hemos analizado los niveles s¿ricos de la prote¿na ANXA5 en 155 pacientes con melanoma y su relaci¿n con la progresi¿n maligna de la enfermedad. Los resultados mostraron que los niveles s¿ricos de ANXA5 aumentan significativamente en los pacientes con melanoma frente a los controles sanos, pero especialmente aumentan significativamente en aquellos pacientes que desarrollaron met¿stasis en los dos primeros a¿os de seguimiento cl¿nico de la enfermedad.An¿lisis estad¿sticos multivariantes de regresi¿n log¿stica y an¿lisis de supervivencia de Kaplan-Meyer ponen en evidencia que los niveles s¿ricos elevados de ANXA5 se relacionan con la progresi¿n metast¿tica del tumor. En conclusi¿n, independientemente del estadio tumoral, el aumento de los niveles s¿ricos de ANXA5 es un marcador pron¿stico de la progresi¿n metast¿tica.